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小鼠肿瘤坏死因子 α(TNF-α)ELISA 检测试剂盒 产品说明书

更新时间:2024-06-17      浏览次数:59

小鼠肿瘤坏死因子 α(TNF-α)ELISA 检测试剂盒

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检测原理

试剂盒采用双抗体夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。往预先包被小鼠肿瘤坏死因子α(TNF-α)捕获抗体的包被微孔中,依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体,经过温育并洗涤。用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的小鼠肿瘤坏死因子α(TNF-α)呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD 值),计算样品浓度。 


样品收集、处理及保存方法 

1. 血清:使用不含热原和内毒素的试管,操作过程中避免任何细胞刺激,收集血液后,3000 转离心 10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。

2. 血浆:EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000 转离心 30 分钟取上清。 

3. 细胞上清液:3000 转离心 10 分钟去除颗粒和聚合物。

4. 组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎。3000 转离心 10 分钟取上清。 

5. 保存:如果样本收集后不及时检测,请按一次用量分装,冻存于-20℃,避免反复冻融,在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。 


自备物品

1. 酶标仪(450nm)。

2. 高精度加样器及枪头:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL。

3. 37℃恒温箱。


操作注意事项 

1. 试剂盒保存在 2-8℃,使用前室温平衡 20 分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶,这属于正常现象,水浴加热使结晶溶解后再使用。

2. 实验中不用的板条应立即放回自封袋中,密封(低温干燥)保存。

3. 预处理后的样本无需稀释,直接取 10μL 加样即可。

4. 严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。

5. 所有液体组分使用前充分摇匀。


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