碘化丙啶（PI）兼容于各种细胞标记技术

碘化丙啶（PI）兼容于各种细胞标记技术

产品描述：科研试剂，广泛应用于分子生物学，药理学等科研方面，严禁用于人体。核酸荧光染色剂。碘化丙啶（Propidium Iodide，PI）是一种常用的细胞核荧光染料，作为一种溴化乙锭（EB）的类似物，能够嵌入碱基之间实现与DNA结合。这种结合没有或者几乎无序列倾向性，大约每4-5个DNA碱基对结合一个染料。PI也能与RNA结合，需要用核酸酶处理来区分DNA和RNA染色。水溶液中PI的最大激发/发射波长是493/636nm。一旦与核酸结合，荧光信号明显增强20-30倍，最大激发波长向红色波段迁移~30-40nm，最大发射波长向蓝色波段迁移~15nm，从而使其最大激发/发射波长变为535/617nm。PI的摩尔吸光系数相对比较低，但是其具有足够大的斯托克司频移来同时检测核酸DNA和荧光标记抗体，只需要使恰当的滤片。PI适用于荧光显微镜，共聚焦显微镜，流式细胞仪以及荧光计分析。PI不能穿透细胞膜而被排斥在活细胞外，但是可以穿过破损的细胞膜而对核染色。利用这一特性，通常与Calcein-AM、Hoechst 33258或 Hoechst 33342等活细胞荧光探针一起使用，同时对活细胞和死细胞染色和鉴定，用于细胞凋亡相关的研究。也可以用作多重荧光染色的复染剂，兼容于各种细胞标记技术，包括直接或者间接的荧光抗体检测，mRNA原位杂交，细胞结构特异性的荧光探针检测法以及组织染色。PI的单独染色也可以进行细胞周期的检测。

PI不能通过活细胞膜，但却能穿过破损的细胞膜而对核染色，常被用来与Calcein-AM，Hoechst 33258/33342或FDA等荧光化合物一起使用，同时对活细胞和死细胞进行染色和鉴定，用于细胞凋亡相关研究。PI的单独染色可以进行细胞周期的检测。PI适用于荧光显微镜，激光共聚焦显微镜，流式细胞仪及荧光分析仪。

使用方法：

1.   储备液配制：将碘化丙啶粉末充分溶解于去离子水中配制成1mg/ml（1.5mM）溶液，于+4℃避光保存，可稳定保存6个月以上。

2.   使用方法：

2.1贴壁细胞复染步骤（荧光显微镜检测）

1）样本准备：根据自身样本选择合适的步骤固定细胞。PI染色一般在其它染色完成后再进行。PI复染要求细胞经透化处理。

2）RNase酶处理：若样本使用多聚甲醛，甲醛或者戊二醛固定，则需要进行RNase处理。若样本用甲醇/醋酸或者丙酮固定，通常不需要此步操作。

a， 于2×SSC (0.3 M NaCl, 0.03 M sodium citrate, pH 7.0)溶液平衡样本；

b， 将本品置于含有100 µg/mL DNase-free RNase的2×SSC溶液中37°C孵育20min；

c， 用2×SSC溶液清洗样本3次，每次1min。

3）复染：

a，于2×SSC (0.3 M NaCl, 0.03 M sodium citrate, pH 7.0)溶液平衡样本；

b，直接用2X SSC稀释1mg/ml（1.5 mM）PI储存液 1:3000，得到500 nM的PI工作液。通常添加300µL染液足够用于一个盖玻片细胞制片。染色1-5min。

c，2×SSC清洗几次，流尽多余的缓冲液后，加入抗淬灭剂封片。

d，选择荧光显微镜的合适滤片进行观察。